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    單細胞平臺
    單細胞免疫組(TCR/BCR)測序

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    單細胞免疫組分析可以通過分析決定B細胞受體(BCR)或T細胞受體(TCR)多樣性的互補決定區(CDR區),全面評估免疫系統的多樣性,深入挖掘免疫組庫與疾病的關系。云序生物擁有BD Rhapsody?單細胞免疫組測序平臺。

    技術簡介:
    將預先制備好的單細胞懸液在Rhapsody平臺上進行單細胞分離捕獲后,進行反轉錄和模板轉換。經過變性、雜交、Klenow擴增,外切酶處理后進行第一輪PCR,之后根據實驗多組學分析需求,分別進行TCR PCR、BCR PCR、Target mRNA PCR、Sample tag PCR和AbSeq PCR。文庫制備完成后,進行測序及后續數據分析。
    技術簡介
    技術優勢:
    1)支持多樣本檢測,提升分析效率,同時降低單樣本分析成本;
    2)可以同時進行蛋白質檢測,實現靶向mRNA+蛋白質+VDJ的單細胞多組學研究


    應用方向:

    免疫組庫在腫瘤研究、移植和免疫重建、自身免疫性疾病、感染性疾病、抗體開發、用藥及疫苗評估等多個方面均有重要的應用價值。


    樣本準備:
    細胞數目:>1-2x105個;
    細胞活率:>80%;
    細胞直徑:<30μm;
    細胞懸液:細胞懸液中應避免存在細胞成團、細胞碎片或其它雜質等現象。同時避免溶液中殘留核酸、EDTA、Dnase I等可能影響后續實驗的物種。


    案例解析:


    案例:不同滑膜組織巨噬細胞亞群調節類風濕性關節炎的炎癥和緩解
    原文: Distinct synovial tissue macrophage subsets regulate inflammation and remission in rheumatoid arthritis
    期刊: Nature Medicine(2020) 影響因子:36.1
    類風濕關節炎(RA)無藥物緩解的免疫調節機制尚不清楚。假設認為滑膜組織巨噬細胞(STM)有助于關節穩態。作者使用單細胞轉錄組學對32000名STM進行分析,并在早期RA、治療期RA和緩解期RA患者中確定了表型變化。每個臨床狀態的特征在四個不同的STM亞群中9個離散表型聚集的不同頻率,這些亞群具有不同的穩態。該細胞圖譜,結合滑膜活檢熒光激活細胞分類的深層表型、空間和功能分析,顯示了兩個STM亞群(MerTKposTREM2high和MerTKposLYVE1pos)具有獨特緩解轉錄組特征富集在炎癥的負調控因子。這些STM是炎癥溶解脂質介質的有效生產者,并在體外誘導滑膜成纖維細胞的修復反應。MerTKpos STMs緩解的低比例與停止治療后疾病暴發的風險增加相關。因此,MerTKpos STM亞群的治療調節可能是RA的潛在治療策略。
    案例:不同滑膜組織巨噬細胞亞群調節類風濕性關節炎的炎癥和緩解



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